在科研领域，对微量物质的精准检测往往是揭开科学奥秘的关键。博清生物科技（南京）有限公司研发生产的荧光计作为一种利用物质荧光特性进行分析检测的仪器，凭借其高灵敏度、高选择性等优势，在环境科学、生物医学、化学分析等众多实验中发挥着不可替代的作用。本实验将围绕荧光计在水体污染物检测和生物样本荧光标记物分析中的应用展开，详细阐述实验设计、操作流程及结果分析，以验证荧光计在科研检测中的准确性与实用性。

一、 实验目的

1、运用荧光计检测不同浓度的多环芳烃（以蒽为例）在水体中的含量，建立标准曲线，评估荧光计对水体污染物的检测能力及灵敏度。

2、通过荧光计测定生物样本（小鼠血清）中荧光标记的蛋白质含量，探究荧光计在生物医学检测中的应用效果，为相关疾病诊断和药物研发提供技术参考。

二、实验设计

（一） 实验材料

1、水样及污染物：

超纯水：用于配制标准溶液和稀释样品。

蒽标准品：纯度≥98%，用于制备不同浓度的多环芳烃标准溶液。

实际水样：采集自不同污染程度的河流、湖泊，经0.45μm滤膜过滤后备用。

2、生物样本：健康小鼠血清样本（提前采集并离心分离，-80℃保存），荧光标记的蛋白质（抗人IgG-FITC，购自专业生物试剂公司）。

3、试剂：

乙腈：色谱纯，用于溶解蒽标准品。

PBS缓冲液：用于稀释生物样本和配制荧光标记物溶液。

牛血清白蛋白（BSA）：用于封闭非特异性结合位点。

4、仪器：

荧光计：具备激发光和发射光波长调节功能，检测灵敏度可达10⁻⁹mol/L级别。

恒温水浴锅：用于样品的温度控制。

漩涡振荡器：用于样品的混合均匀。

微量移液器及配套吸头：用于准确移取试剂和样品。

石英比色皿：用于盛放检测样品，确保荧光信号的准确测量。

（二） 样本分组与处理

1、水体污染物检测：

标准溶液组：将蒽标准品用乙腈溶解后，再用超纯水稀释，配制浓度为0μg/L、1μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L的系列标准溶液，每组设置3个平行样。

实际水样组：将采集的实际水样分别编号，分为轻度污染水样、中度污染水样和重度污染水样组，每组水样同样设置3个平行样。

2、生物样本检测：

标准曲线组：将荧光标记的抗人IgG-FITC用PBS缓冲液稀释，配制浓度为0ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL的系列标准溶液，每组设置3个平行样。

样本检测组：取小鼠血清样本，用含1% BSA的PBS缓冲液进行适当稀释，每个样本设置3个平行样。

三、实验操作步骤

（一） 水体污染物检测

1、标准曲线绘制：

分别取不同浓度的蒽标准溶液各2mL，转移至石英比色皿中。

将荧光计预热30分钟，设置激发光波长为252nm，发射光波长为380nm（蒽的特征激发和发射波长）。

依次测定各标准溶液的荧光强度，记录数据。

2、实际水样检测：

取2mL过滤后的实际水样于石英比色皿中。

按照标准曲线测定的条件，使用荧光计测定水样的荧光强度。

若水样荧光强度超出标准曲线范围，用超纯水进行适当稀释后重新测定。

（二） 生物样本检测

1、标准曲线绘制：

取不同浓度的荧光标记蛋白质标准溶液各200μL，加入96孔黑色酶标板中。

将酶标板放入荧光计配套的检测模块中，设置激发光波长为488nm，发射光波长为520nm（FITC的特征激发和发射波长）。

测定各标准溶液的荧光强度，记录数据。

2、样本检测：

取稀释后的小鼠血清样本200μL，加入96孔黑色酶标板中。

按照标准曲线测定的条件，使用荧光计测定样本的荧光强度。

四、实验结果分析

（一） 水体污染物检测结果

1、标准曲线绘制：以蒽标准溶液浓度为横坐标，对应的荧光强度平均值为纵坐标，使用Origin软件绘制标准曲线，得到线性回归方程y=ax+b（其中y为荧光强度，x为蒽浓度），并计算相关系数R²，确保R²≥0.99，表明标准曲线具有良好的线性关系。

2、实际水样浓度计算：将实际水样的荧光强度代入标准曲线回归方程，计算出各水样中蒽的浓度。同时，计算每组水样浓度的平均值、标准差和相对标准偏差（RSD），评估检测结果的准确性和重复性。

3、结果呈现：以表格形式列出标准溶液浓度、对应的荧光强度、实际水样编号及检测浓度；绘制柱状图对比不同污染程度水样中蒽的浓度差异。

（二） 生物样本检测结果

1、标准曲线绘制：同样以荧光标记蛋白质标准溶液浓度为横坐标，荧光强度平均值为纵坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程及相关系数R²，确保曲线可靠性。

2、样本浓度计算：将小鼠血清样本的荧光强度代入标准曲线方程，计算样本中荧光标记蛋白质的含量。分析不同样本间蛋白质含量的差异，结合生物学背景探讨其潜在意义。

3、结果呈现：用表格展示标准溶液浓度、荧光强度及样本检测结果；通过散点图展示样本蛋白质含量的分布情况。

五、实验结论

本实验通过荧光计对水体污染物和生物样本荧光标记物的检测，成功建立了相应的检测方法和标准曲线。实验结果表明，博清生物科技（南京）有限公司研发生产的荧光计在水体多环芳烃检测和生物样本荧光标记物分析中表现出良好的准确性和灵敏度，能够满足科研实验对微量物质检测的需求。在水体污染物检测方面，博清生物科技（南京）有限公司研发生产的荧光计可快速、准确地测定不同污染程度水样中蒽的含量，为环境监测和污染治理提供有力的数据支持；在生物样本检测中，博清生物科技（南京）有限公司研发生产的荧光计能够精确测定血清中荧光标记蛋白质的含量，为生物医学领域的疾病诊断、药物研发等研究提供了有效的检测手段。后续研究可进一步拓展荧光计在其他科研领域的应用，优化检测条件，提高检测效率和准确性。